GB4789.2-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測定內(nèi)容是什么?百檢網(wǎng)檢測范圍廣泛，可根據(jù)客戶需求選擇合適的檢測標(biāo)準(zhǔn)及項(xiàng)目安排檢測，全國近千家合作實(shí)驗(yàn)室，CMA/CNAS資質(zhì)齊全，可就近安排寄樣檢測。今天百檢網(wǎng)就給大家簡單介紹一下GB4789.2-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測定標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容。

1.范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中菌落總數(shù)( Aerobic plate count)的測定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中菌落總數(shù)的測定

2.術(shù)語和定義

菌落總數(shù) aerobic plate count

食品檢樣經(jīng)過處理,在一定條件下(如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間等)培養(yǎng)后,所得每g(mL)檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。

3.設(shè)備和材料

除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下：

3.1 恒溫培養(yǎng)箱:36℃±1℃,30℃±1℃

3.2 冰箱:2℃～5℃

3.3 恒溫水浴箱:46℃±1℃。

3.4 天平:感量為0.1g。

3.5 均質(zhì)器。

3.6 振蕩器。

3.7 無菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸頭。

3.8 無菌錐形瓶:容量250mL、500mI。

3.9 無菌培養(yǎng)皿:直徑90mm。

3.10 pH計(jì)或pH比色管或精密pH試紙。

3.11 放大鏡或/和菌落計(jì)數(shù)器。

4.培養(yǎng)基和試劑

4.1 平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基:見A.1。

4.2 磷酸鹽緩沖液:見A.2。

4.3 無菌生理鹽水:見A.3。

5.檢驗(yàn)程序

菌落總數(shù)的檢驗(yàn)程序見圖1

6.操作步驟

6.1 樣品的稀釋

6.1. 1 固體和半固體樣品:稱取25g樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi),8000r/min~10000r/min均質(zhì)1min~2min,或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2min,制成1:10的樣品勻液。

6.1.2 液體樣品:以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠)中,充分混勻,制成1:10的樣品勻液。

6.1.3 用lmL無菌吸管或微量移液器吸取Ⅰ:10樣品勻液ⅠmL,沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面),振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻,制成1:100的樣品勻液。

6.1.4 按6.1.3操作,制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次,換用1次1mL無菌吸管或吸頭。

6.1.5 根據(jù)對樣品污染狀況的估計(jì),選擇2個(gè)~3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液),在進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí),吸取1mL樣品勻液于無菌平皿內(nèi),每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí),分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個(gè)無菌平皿內(nèi)作空白對照。

6.1.6 及時(shí)將15mL～20mL冷卻至46℃的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(可放置于46℃±1℃恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿,并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。

6.2 培養(yǎng)

6.2.1 待瓊脂凝固后,將平板翻轉(zhuǎn),36℃±1培養(yǎng)48h±2h。水產(chǎn)品30℃±1℃培養(yǎng)72h±3h。

6.2.2 如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時(shí),可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基(約4mL),凝固后翻轉(zhuǎn)平板,按6.2.1條件進(jìn)行培養(yǎng)。

6.3 菌落計(jì)數(shù)

6.3.1 可用肉眼觀察,必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器,記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位( colony- forming units,CFU)表示。

6.3.2 選取菌落數(shù)在30CFU～300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù),大于300CFU的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。

6.3.3 其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長時(shí),則不宜采用,而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù);若片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2,代表一個(gè)平板菌落數(shù)。

6.3.4 當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時(shí),則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。

7.結(jié)果與報(bào)告

7.1 菌落總數(shù)的計(jì)算方法

7.1.1 若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi),計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值,再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),作為每g(mL)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。

7.1.2 若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí),按式(1)計(jì)算:

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